Определение групп крови системы АВ0

Для определения групп крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Использование стандартных сывороток

Оснащение: предметные стекла, вата, стандартные сыворотки крови групп 0(I), А(II) и В(III).

Ход работы: предметное стекло поместите на белую бумагу и нанесите (не смешивая) по капле стандартной сыворотки 0(I), А(II) и В(III) групп. Возьмите другое предметное стекло, и первым его углом перенесите небольшое количество крови, полученной из пальца, в каплю сыворотки I группы, затем вторым углом стекла перенесите такое же количество крови в сыворотку II группы, третьим углом – в сыворотку III группы крови. При этом, каждый раз перемешивайте тщательно кровь в капле сыворотки, пока смесь не примет равномерно розовый цвет. Акция агглютинации наступает через 1-5 минут.

При отсутствии агглютинации, капля остается равномерно окрашенной. При агглютинации капля состоит из комочков красного цвета, разделенных прозрачной смесью плазмы и стандартной сыворотки.

Для исключения «холодовой агглютинации» к капле сыворотки с кровью прилейте каплю физиологического раствора комнатной температуры.

Группу крови установите в зависимости от агглютинации (таб.3):

1. При отсутствии агглютинации со всеми тремя сыворотками, кровь принадлежит к 0(I) группе.
2. При агглютинации с сыворотками I и III групп, кровь принадлежит ко А(II) группе.
3. При агглютинации с сыворотками I и II групп, кровь принадлежит к В(III) группе.
4. При агглютинации с сыворотками I, II и III групп, кровь принадлежит к АВ(IV) группе.

Использование цоликлонов

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови человека системы АВ0 вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М.

Цоликлоны готовят из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. В отличии от сывороток, в цоликлонах наблюдается высокий титр антител.

Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирующих АВ0-сывороток.

Оснащение: цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ; пластина или планшет, пипетки, стеклянные палочки.

Ход работы: нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле (0,01 – 0,03 мл) исследуемой крови, смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции при периодическом покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, однако наблюдение следует вести 3 минуты.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице 4.

Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Рекомендуется сделать цветной рисунок, демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в разных каплях сыворотки или цоликлона. Определите групповую принадлежность исследуемой крови и сделайте вывод, отразив значения определения группы крови системы АВ0 для клиники.