Определение групп крови системы АВ0 - MedFsh.ru
Определение групп крови системы АВ0
Башкирский государственный медицинский университет
БашГМУ
Нормальная физиология

Определение групп крови системы АВ0

Для определения групп крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Использование стандартных сывороток

Оснащение: предметные стекла, вата, стандартные сыворотки крови групп 0(I), А(II) и В(III).

Ход работы: предметное стекло поместите на белую бумагу и нанесите (не смешивая) по капле стандартной сыворотки 0(I), А(II) и В(III) групп. Возьмите другое предметное стекло, и первым его углом перенесите небольшое количество крови, полученной из пальца, в каплю сыворотки I группы, затем вторым углом стекла перенесите такое же количество крови в сыворотку II группы, третьим углом – в сыворотку III группы крови. При этом, каждый раз перемешивайте тщательно кровь в капле сыворотки, пока смесь не примет равномерно розовый цвет. Акция агглютинации наступает через 1-5 минут.

При отсутствии агглютинации, капля остается равномерно окрашенной. При агглютинации капля состоит из комочков красного цвета, разделенных прозрачной смесью плазмы и стандартной сыворотки.

Для исключения «холодовой агглютинации» к капле сыворотки с кровью прилейте каплю физиологического раствора комнатной температуры.

Группу крови установите в зависимости от агглютинации (таб.3):

  1. При отсутствии агглютинации со всеми тремя сыворотками, кровь принадлежит к 0(I) группе.
  2. При агглютинации с сыворотками I и III групп, кровь принадлежит ко А(II) группе.
  3. При агглютинации с сыворотками I и II групп, кровь принадлежит к В(III) группе.
  4. При агглютинации с сыворотками I, II и III групп, кровь принадлежит к АВ(IV) группе.
Интерпретация результатов с использованием стандартных сывороток

Использование цоликлонов

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови человека системы АВ0 вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М.

Цоликлоны готовят из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. В отличии от сывороток, в цоликлонах наблюдается высокий титр антител.

Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирующих АВ0-сывороток.

Оснащение: цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ; пластина или планшет, пипетки, стеклянные палочки.

Ход работы: нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле (0,01 – 0,03 мл) исследуемой крови, смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции при периодическом покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, однако наблюдение следует вести 3 минуты.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице 4.

Интерпретация результатов с использованием цоликлонов

Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Рекомендуется сделать цветной рисунок, демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в разных каплях сыворотки или цоликлона. Определите групповую принадлежность исследуемой крови и сделайте вывод, отразив значения определения группы крови системы АВ0 для клиники.